Испытание микробиологической чистоты лекарственных средств — обязательный этап контроля качества нестерильных препаратов: таблеток, капсул, мазей, сиропов, растворов и растительного сырья. Испытание охватывает несколько взаимосвязанных модулей: понятие микробиологической чистоты и её нормативную базу, порядок отбора проб, два базовых метода исследования — прямое посевное и мембранную фильтрацию, требования к условиям окружающей среды и питательным средам, критерии приёмки по фармакопейным нормам, а также перечень определяемых микробиологических показателей. Методы и стандарты микробиологической чистоты лекарственных средств опираются на требования Государственной фармакопеи и Европейской фармакопеи (EP), harmonised в части перечня тест-микроорганизмов и нормативов. Результаты испытания позволяют судить о безопасности препарата, стабильности технологии его производства и соблюдении санитарного режима на всех стадиях выпуска.
Микробиологическая
чистота лекарственных средств: суть и нормативная база
Под микробиологической чистотой понимают совокупность нормируемых характеристик, отражающих содержание в препарате жизнеспособных микроорганизмов. Для нестерильных лекарственных средств регламентируются общее число аэробных мезофильных бактерий и грибов, а также отсутствие отдельных условно-патогенных видов: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp. и Candida albicans в определённом объёме или массе образца. Методологическая база задана общей фармакопейной статьёй Государственной фармакопеи и главой 2.6.12 Европейской фармакопеи; подходы этих документов гармонизированы по составу тест-штаммов, схеме анализа и форме представления результатов. В зависимости от способа применения препараты разделяют на категории, для которых установлены разные предельные значения обсеменённости. Стерильные формы (инъекционные растворы, офтальмологические препараты) контролируются отдельным испытанием на стерильность и в понятие микробиологической чистоты не входят.
Виды образцов и правила отбора проб
Объектами испытания служат готовые лекарственные формы, субстанции, вспомогательные вещества и лекарственное растительное сырьё. Отбор проб проводится в асептических условиях квалифицированным персоналом с использованием стерильного инструмента и стерильной тары. Пробу отбирают из разных точек партии или упаковки, чтобы она отражала средний уровень обсеменённости; для сыпучих форм применяют метод квадратования или делителя проб. Объём пробы должен быть достаточным для количественного определения и качественного выявления всех нормируемых микроорганизмов, а также для резервного анализа при спорных результатах. Каждая проба сопровождается маркировкой с указанием наименования, номера серии, даты отбора и подписи отбиравшего. Транспортирование выполняется в условиях, исключающих вторичную контаминацию и изменение титра микроорганизмов; до начала испытания пробы хранят при температуре, рекомендованной для конкретной формы.
спытаний
— прямое посевное и мембранная фильтрация
Количественное и качественное определение ведут двумя способами. Метод прямого посева состоит во внесении точного объёма или навески образца (как правило, 10 г или 10 мл) непосредственно в питательную среду либо на её поверхность с последующим инкубированием и подсчётом колоний; он применим к образцам с выраженной антимикробной активностью, устраняемой нейтрализаторами, и к препаратам, не поддающимся фильтрации. Мембранная фильтрация предполагает пропускание раствора образца через мембранный фильтр с размером пор около 0,45 мкм, задерживающий микроорганизмы; фильтр промывают для удаления ингибирующих веществ и переносят на поверхность питательной среды. Этот вариант предпочтителен для жидких и растворимых форм, а также при высокой собственной антимикробной активности препарата. Для жидких сред и сиропов перед анализом может применяться серийное разведение; выбор конкретной схемы фиксируют в протоколе испытания.
Контроль
условий окружающей среды и питательные среды
Испытание проводят в помещениях микробиологического блока, разделённых на зоны подготовки, посева и инкубирования, с контролируемым воздухообменом и регулярным мониторингом микрофлоры воздуха и поверхностей. Критическими параметрами являются чистота рабочей зоны, температура инкубации и стерильность используемых сред. Для количественного подсчёта бактерий применяют среду типа soybean-casein digest agar (триптиказо-соевый агар), для грибов — Sabouraud dextrose agar или среду Сабуро с антибактериальными добавками; для выявления конкретных видов используют селективные среды с индикаторными и дифференциальными свойствами. Каждая партия среды подлежит контролю ростовых свойств на тест-штаммах и стерильности. При анализе препаратов с консервантами или антимикробными компонентами в среды вносят нейтрализаторы либо подтверждают валидацией, что рост тест-микроорганизмов не подавляется остаточной активностью образца.
Критерии
приёмки и оценка результатов по ГФ и EP
Оценка строится на сопоставлении полученных значений с предельными нормами категории, соответствующей способу применения препарата. Для препаратов первой категории (пероральные формы, субстанции) регламентируется общее аэробное микробное число и число грибов в 1 г или 1 мл, а также отсутствие E. coli в определённой навеске; для препаратов наружного и местного применения дополнительно контролируется отсутствие S. aureus и P. aeruginosa. Если фактический результат не превышает предельное значение более чем допускает фармакопейная таблица, партию признают соответствующей. При результатах, близких к границе нормы, фармакопея допускает повторное испытание с увеличенным числом образцов по установленной схеме. Регистрируют не только числа колониеобразующих единиц, но и условия инкубации, разведения, использованные среды; итог оформляют протоколом с указанием соответствия или несоответствия нормам категории.
Совместно
определяемые микробиологические показатели
В рамках одного испытания определяют набор взаимодополняющих показателей. К количественным относятся общее число аэробных мезофильных микроорганизмов и суммарное число дрожжей и плесневых грибов, выражаемые в КОЕ на грамм или миллилитр. Качественные показатели сводятся к выявлению нормируемых условно-патогенных видов, для каждого из которых установлены свой объём образца и селективная схема выделения. Для отдельных категорий дополнительно нормируется отсутствие энтеробактерий (кроме ожидаемых для конкретной формы) и Bile-tolerant gram-negative bacteria. Наряду с чистотой в комплексной программе контроля препарата могут оцениваться эффективность антимикробных консервантов и испытание на стерильность для соответствующих форм; эти испытания выполняются по отдельным методикам, но опираются на ту же инфраструктуру микробиологической лаборатории и те же тест-штаммы, что делает их объединение в одном протоколе контроля целесообразным.
FAQ
Как передать образцы лекарственных средств на испытание микробиологической чистоты и что согласовать с лабораторией?
Заказчик направляет заявку с указанием формы препарата, способа применения (для определения категории), номера серии и требуемого перечня показателей. Лаборатория подтверждает объём пробы, условия транспортирования и наличие антимикробных компонентов, влияющих на выбор метода. До начала работ согласуют методику — прямое посев или мембранную фильтрацию — и нормативный документ, по которому будет оцениваться результат.
Какие
факторы влияют на стоимость испытания микробиологической чистоты лекарственных средств?
Стоимость зависит от количества определяемых показателей (общее микробное число, грибы, отдельные условно-патогенные виды), категории препарата, необходимости нейтрализации антимикробной активности и подготовительных разведений. Увеличивают объём работ повторные испытания при результатах, близких к норме, а также контрольный пересев и идентификация выделенных культур. Число образцов и схема отбора проб также отражаются на итоговой трудоёмкости.
Как поступают при спорных или неудовлетворительных результатах испытания микробиологической чистоты?
При значениях на границе нормы допускается повторное испытание на увеличенном числе образцов по фармакопейной схеме; решение о соответствии принимают по его итогу. Если результат подтверждается, исследуют причину: проверяют ростовые свойства сред, условия инкубации и отсутствие подавления роста остаточной активностью препарата. При разногласиях заказчик вправе запросить протокол с полными данными о разведениях, средах и подсчёте колоний для независимой оценки.
